厭氧培養(yǎng)箱之厭氧菌的培養(yǎng)操作

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個(gè)無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實(shí)際情況選用。

1．厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。

2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有硼Q化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內(nèi)在半小時(shí)內(nèi)造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài)，可以孵育。

3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）即厭氧培養(yǎng)箱。它是一個(gè)密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個(gè)有機(jī)玻璃做的透明面板，板上裝有兩個(gè)手套，可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作，故名。箱側(cè)有一交換室，具有內(nèi)外二門，內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關(guān)上外門進(jìn)行抽氣和換氣（H2，CO2，N2）達(dá)到厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開，將物品移入箱內(nèi)，關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài)，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi)，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適于作厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究，大量培養(yǎng)基可放入作預(yù)還原和厭氧性無菌試驗(yàn)。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)節(jié)。

4.厭氧盒：原理同厭氧袋，有成品銷售。

5.生物耗氧法：在一密閉的容器內(nèi)放以生物（多是植物），消耗氧氣，同時(shí)產(chǎn)生二氧化碳，供細(xì)菌生長用。我沒見過。

6.焦性末食子酸法：在一潔凈的玻片上鋪上紗布或?yàn)V紙，均勻撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速將已接種細(xì)菌的平板倒扣在上面，用融化的白蠟封邊，造成一個(gè)封閉空間。焦性末食子酸與堿反應(yīng)后耗氧。該法用于厭氧不嚴(yán)格的厭氧菌的培養(yǎng)，簡單。如有梭狀芽孢桿菌。

7.皰肉培養(yǎng)基：本身就是一個(gè)不需特殊設(shè)備的厭氧培養(yǎng)法。皰肉和肉湯裝入大試管，液面封凡士林，造成無氧環(huán)境。

操作室厭氧環(huán)境形成：按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無毒塑料袋。通電源開照明燈，開控溫儀，調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。關(guān)緊取樣室內(nèi)外門，并抽真空校驗(yàn)。操作室內(nèi)第一次置換（氮?dú)庵脫Q）：先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口，另一頭插入塑料袋。接通氮?dú)膺M(jìn)氣路，打開氮?dú)饪刂崎y，使二只塑料袋充足氮?dú)猓缓笤o袋口。把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸地放于操作室內(nèi)，至全部放出。操作室第二次置換（氮?dú)庵脫Q）重復(fù)一 次充氮過程，并注意隨時(shí)用腳踏開關(guān)開閉排氣。操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為：N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%）調(diào)換氣路打開混合氣道通閥門進(jìn)氣，充氣時(shí)要隨時(shí)腳踏開關(guān)開閉排氣?；旌蠚獬錆M塑料袋后，關(guān)掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經(jīng)過流量計(jì)輸入操作并調(diào)整流量計(jì)，流量為每分鐘10毫升左右。把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。通過三次換氣后，操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。操作室內(nèi)打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧，一 小時(shí)后打開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。開紫外線滅菌燈，室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間自定。

厭氧培養(yǎng)箱注意事項(xiàng)：盡可能地安裝于空氣清靜，溫度變化較小的地方。開機(jī)前應(yīng)全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的說明書、掌握正確的使用方法。培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達(dá)到絕對厭氧環(huán)境后放入。如發(fā)生故障（停氣等原因）操作室內(nèi)仍可保持12小時(shí)厭氧狀態(tài)。（超過12小時(shí)則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理）。經(jīng)常注意氣路有無漏氣現(xiàn)象。調(diào)換氣瓶時(shí)，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體。真空泵按要求使用，定期檢查加油。停止使用，關(guān)閉總電源鍵，及設(shè)備后部的電源開關(guān)。

YQX-Ⅱ厭氧培養(yǎng)箱是一種在無氧環(huán)境條件下進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及操作的專用裝置。它能提供嚴(yán)格的厭氧狀態(tài)恒定的溫度培養(yǎng)條件和具有一個(gè)系統(tǒng)化、科學(xué)化的工作區(qū)域。在本裝置內(nèi)操作培養(yǎng)，可以培養(yǎng)難生長的厭氧生物，又能避免以往厭氧生物在大氣中操作時(shí)接觸氧而死亡的危險(xiǎn)性。因此本裝置是厭氧生物檢測科研的理想工具。本裝置也是一物多用的良好儀器，如改變操作方式，為微需氧菌的生長繁殖提供良好的生長條件。